Caspase-2活性檢測試劑盒 細胞增殖
簡要描述:
Caspase-2活性檢測試劑盒 細胞增殖 Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一個高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特異性識別底物中的天冬氨酸殘基,在介導細胞凋亡的過程中發(fā)揮著非常重要的作用。
產品時間:2024-05-28
Caspase-2 Activity Assay Kit (Colorimetric)
Caspase-2活性檢測試劑盒(比色法)
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格(元) |
Caspase-2活性檢測試劑盒(比色法) | MX3224-20T | 20T | 930 |
Caspase-2活性檢測試劑盒(比色法) | MX3224-100T | 100T | 2980 |
產品描述
Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一個高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特異性識別底物中的天冬氨酸殘基,在介導細胞凋亡的過程中發(fā)揮著非常重要的作用。Caspases以潛在酶原的形式表達,通過自發(fā)蛋白分解機制或經其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工處理的方式被活化。人caspases可細分為三大功能組:細胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡啟動(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡執(zhí)行(caspase-3,-6和-7)。
Caspase-2(Caspase 2),也稱為Nedd2、ICH-1,含核定位所依賴的長前肽結構域的一類caspase。一旦凋亡通路被激活,caspase酶原在Asp316位上被切割生成一個14kDa片段和一個32kDa的前肽結構域/大亞基。接下來在Asp152和Asp330被切割,進一步生成18kDa大亞基和12kDa小片段。Caspase-2是應對基因毒性應激或有絲分裂障礙的核凋亡反應物。一旦招募生成含p53誘導死亡結構域蛋白-PIDD的復合物,caspase 2被激活。因此,Caspase-2被認為是核啟動caspase,并且在下游的凋亡途徑中需要激活caspase-9和caspase-3。
Caspase-2活性檢測試劑盒(比色法)(Caspase-2 Activity Assay Kit, Colorimetric or Caspase-2 Colorimetric Assay Kit)以偶聯(lián)上發(fā)色基團pNA的caspase-2序列特異性的多肽為底物。當底物被caspase-2剪切后,發(fā)色基團被釋放出來,進而用酶標儀或分光光度計來測定其吸光值(λ=405nm或400nm)。通過計算OD凋亡誘導組/OD陰性對照組的比值來確定凋亡誘導組caspase-2的活化程度。
本品適用于培養(yǎng)細胞以及新鮮組織的caspase-2活性檢測。
產品包裝
編號 | 組分名稱 | 保存方法 | 貨號(規(guī)格) | |
MX3224-20T | MX3224-100T | |||
MX3224-A | Lysis Buffer裂解緩沖液 | 2-8℃ | 5ml | 20ml |
MX3224-B | 2× Reaction Buffer 2×反應緩沖液 | 2-8℃ | 1ml | 5ml |
MX3224-C | Caspase-2 Substrate Caspase-2底物 | -20℃避光 | 100μl | 500μl |
MX3224-D | 0.1M DTT | -20℃避光 | 60μl | 250μl |
保存與運輸方法
保存:-20℃保存,1年有效。開盒后置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-2 Substrate和0.1M DTT需要避光凍存。
運輸:冰袋運輸。
注意事項
1) Caspase-2 Substrate需避光保存和使用。
2) 某些凋亡誘導劑誘導的凋亡可能通過caspase-2非依賴的方式進行,此種情況使用本品檢測的caspase-2活性無明顯變化,則,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。
3) 起始細胞數量需達3~5×106個或新鮮組織量達50~100mg,以保證達到測定所需的100~200μg蛋白量。Caspase-2的活性與細胞裂解后的蛋白含量有關,如測定的OD值偏低,可通過增加細胞數量或組織量的方法來提高蛋白量。
4) 優(yōu)先選擇測定λ=405nm的吸光值;如有困難,再測定λ=400nm的吸光值。
5) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1.需要的其他試劑和材料
儀器:低溫高速離心機、酶標儀或分光光度計(100μl的比色皿)(λ=405nm或400nm)、微量移液器、玻璃勻漿器(組織樣本)
耗材:1.5ml微量離心管、96孔酶標板(透明)或100μl的比色皿
試劑:PBS、蛋白定量試劑(比如:Bradford法蛋白濃度測定試劑盒)
2.試劑準備
2.1 Lysis Buffer(含DTT)
于實驗前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的裂解工作液,置于4℃或冰上待用。
2.2 2×Reaction Buffer(含DTT)
于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例準備足量的反應工作液。
3.樣本準備
3.1 細胞裂解
a)用合適方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性對照組(不加誘導劑),收集3~5×106個細胞。
b)PBS洗滌細胞2次(2000rpm,離心5min),盡量吸盡PBS上清。
c)往離心的沉淀細胞中加入15~200μl預冷的Lysis Buffer(含DTT),吹打混勻。
d)置冰上裂解20~60min,其間渦旋振蕩3~4次,每次10s;或凍融2~3次。
e)4℃,10,000rpm離心1min。
f)小心吸取上清(含裂解釋放的蛋白質)轉移到新的EP管內,置于冰上待用。
g)取少量上清(1~2μl),用常規(guī)方法(Bradford法)測定蛋白濃度。
3.2 組織裂解
a)取50~100mg組織置于培養(yǎng)皿內,用手術剪剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入150~200μl預冷的Lysis Buffer(含DTT),用玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作。
b)將組織勻漿液轉移到1.5ml預冷的離心管,10,000rpm,4℃離心5min。
c)小心吸取上清(含裂解釋放的蛋白質)轉移到新的EP管內,置于冰上待用。
d)取少量上清(1~2μl),用常規(guī)方法(Bradford法)測定蛋白濃度。
4.Caspase-2活性檢測
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