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產(chǎn)品中心
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析

簡(jiǎn)要描述:

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析 大腸桿菌OverExpress C43(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-14

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OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞


產(chǎn)品標(biāo)簽

OverExpress C43(DE3)C43(DE3) pLysS;BL21 (DE3);OverExpress C41(DE3)表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞;毒性蛋白表達(dá);pET表達(dá)載體;


產(chǎn)品訂購(gòu):

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MF2342-1000UL

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

396

MF2342-5000UL

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

50×100μl

1696


菌株描述

OverExpress C41(DE3)C41(DE3) pLysS、C43(DE3)C43(DE3) pLysS都是大腸桿菌(E. Coli)菌株,有效表達(dá)不同物種有機(jī)生物體包括細(xì)菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳動(dòng)物來(lái)源的毒性蛋白。

OverExpress C43(DE3)菌株來(lái)源于OverExpress C41(DE3)菌株,通過(guò)篩選OverExpress C41(DE3)對(duì)另一個(gè)不同毒性蛋白的抗性菌株而獲得。OverExpress C41(DE3)來(lái)源于BL21(DE3),此菌株含一個(gè)突變,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,從而預(yù)防許多重組毒性蛋白過(guò)表達(dá)引起的細(xì)胞死亡。OverExpress C43(DE3)與OverExpress C41(DE3)相比,至少攜帶另一個(gè)不同突變,使其獲得更廣泛更高的毒性蛋白表達(dá)能力。

OverExpress C43(DE3)菌株含DE3區(qū),表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體(其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因),適用于靶基因克隆進(jìn)入T7啟動(dòng)子表達(dá)載體比如pET系列的蛋白生產(chǎn)。

OverExpress C43(DE3)菌株基因型:FompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)


產(chǎn)品描述

品是大腸桿菌OverExpress C43(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×108 cfu/μg DNA。且在-80能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。


產(chǎn)品包裝

組分編號(hào)

組分名

貨號(hào)(規(guī)格)

MF2342-1000UL

MF2342-5000UL

MF2342-A

OverExpress C43(DE3) Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2342-B

Control Plasmid puC19, 10pg/μl

10μl

10μl


注意事項(xiàng)

1) 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80保存,不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2) hao在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞,不可在冰上放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3) 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),需在相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4) 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。

5) 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl),供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

6) 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

7) 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度范圍可選:0.1~2mM。

8) 為了得到足量的蛋白,需就加誘導(dǎo)時(shí)間、溫度、IPTG濃度進(jìn)行優(yōu)化。

9) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1) 從-80冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物),用手輕彈管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰浴靜置25min。

2) 42水浴熱激45s,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2min。此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

3) 向每個(gè)離心管中加700 μl無(wú)菌的2YT或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37 搖床,200 rpm振蕩培養(yǎng)60min,目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。

4) 低速離心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用槍輕輕吹打重懸菌塊,之后加到篩選抗生素2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于室溫(或37)直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37培養(yǎng)過(guò)夜。

【注意】:

a)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可不用離心,直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,則通過(guò)離心(5000 rpm,1min)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。

b)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c)涂布剩余的菌液可置于4保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。


相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

MF2331-1000UL

BL21 (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2332-1000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2333-1000UL

Rosetta (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2341-1000UL

Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2342-1000UL

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2343-1000UL

TB1 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2344-1000UL

Tuner(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2339-1000UL

Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2340-1000UL

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2334-1000UL

BL21 Star (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2335-1000UL

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MS0021-10G

Chloramphenicol, USP Grade 氯mei素

10g

MS0018-10G

Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青mei素鈉

10g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青mei素二鈉鹽

5g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素

10g

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade 利fu平

1g

MF2002-1G

IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷

1g


附錄I 蛋白誘導(dǎo)步驟(僅作參考)

1)從新鮮涂布平板上挑取一單克隆,轉(zhuǎn)移到含相應(yīng)抗生素的5ml LB液體培養(yǎng)基內(nèi)。

2)37℃搖菌培養(yǎng)過(guò)液。為了小化誘導(dǎo)前目的蛋白的小化表達(dá),添加葡萄糖(終濃度為0.2% w/v)到生長(zhǎng)培養(yǎng)基內(nèi)。

3)將步驟2)中過(guò)夜培養(yǎng)的菌液吸取0.5ml接種到含相應(yīng)抗生素的50ml LB液體培養(yǎng)基內(nèi)。

4)37℃搖菌培養(yǎng)直至OD600達(dá)到0.6~0.8。

5)加入IPTG使其終濃度為1mM。目的蛋白的加誘導(dǎo)時(shí)間可能在2~16h,依蛋白而異。

6)37℃培養(yǎng)3~4h。為了確定目的蛋白的加誘導(dǎo)時(shí)間,建議作一個(gè)時(shí)間周期優(yōu)化實(shí)驗(yàn),范圍從2~16h。

7)將培養(yǎng)物冰浴10min。4℃,5,000 x g離心10min收集菌株。

8)吸掉上清,將沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的溫度)。


IPTG母液(1M)配制

稱量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于適量去離子水,充分溶解后,調(diào)整終體積到10ml,并過(guò)濾除菌,即得到1M ITPG母液。


— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。


大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析


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