酵母感受態(tài)細(xì)胞 克隆與表達(dá)分析
簡(jiǎn)要描述：
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母感受態(tài)細(xì)胞 克隆與表達(dá)分析，是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或雙雜交文庫(kù)篩選和構(gòu)建。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-21
打印當(dāng)前頁(yè)Y2HGold Chemically Competent Cell
酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品標(biāo)簽
Matchmarker GAL4雙雜交系統(tǒng)；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | MF2352-1000UL | 10×100μl | 290 |
MF2352-5000UL | 50×100μl | 1320 |
產(chǎn)品包裝
組分編號(hào) | 組分名稱 | 保存 | 貨號(hào)（規(guī)格） | |
MF2352-1000UL | MF2352-5000UL | |||
MF2352-A | Y2HGold Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2352-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2352-C | Carrier DNA (5μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2352-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
產(chǎn)品描述
Y2HGold是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或雙雜交文庫(kù)篩選和構(gòu)建。Y2HGold-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用，分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標(biāo)志為Trp1，用于表達(dá)DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；后者篩選標(biāo)志為Leu，用于表達(dá)AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四個(gè)報(bào)告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分別由三個(gè)*異源的Gal4反應(yīng)啟動(dòng)元件-G1，G2，M1操控，這三種啟動(dòng)子只有GAL4識(shí)別的17bp核心區(qū)相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母雙雜交假陽(yáng)性發(fā)生的概率。此外，新報(bào)告基因AUR1-C與以往的營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比，具有更低背景，這一優(yōu)勢(shì)也可降低酵母雙雜交假陽(yáng)性發(fā)生的概率。
本品為經(jīng)特殊工藝制備的Y2HGold酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。
基因型
MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, GAL2UAS- Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1
注意事項(xiàng)
1. 在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度質(zhì)?？上鄳?yīng)減少用于涂板的菌量。同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)?？蛇m當(dāng)增加質(zhì)粒的用量。
3. Y2HGold對(duì)高溫敏感，zui適生長(zhǎng)溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化率都呈指數(shù)下降。
4.菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中的一種常見現(xiàn)象。當(dāng)酵母細(xì)胞在平板上培養(yǎng)幾天，將平板內(nèi)的腺嘌呤消耗殆盡，那時(shí)酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細(xì)胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。
5. 酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度比YPDA培養(yǎng)基慢，營(yíng)養(yǎng)缺陷成分越多，生長(zhǎng)越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克?。煌?/span>SD雙缺平板于29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；
6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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