Enhanced Potassium Green-2 AM 鉀離子指示探針

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶，強(qiáng)烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級（MS4301-1G）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。 

產(chǎn)品標(biāo)簽

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM） K+indicator；PBFI AM 鉀離子指示劑/探，SBFI AM 鈉離子指示劑/探針，Asante Potassium Green-2，Valinomycin 纈氨霉素

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM）是Asante Potassium Green-2 AM（APG-2 AM）的替代物，

是一種具細(xì)胞膜滲透性的新型K+熒光探針，具有容易加載、緩慢泄露、良好光穩(wěn)定性和寬動(dòng)力學(xué)范圍等理想特征，正好彌補(bǔ)傳統(tǒng)K+熒光探針PBFI AM（#MX4510）的缺陷。EPG-2 AM被可見光激發(fā)，激發(fā)波長為517nm，但也能被傳統(tǒng)波長488nm激發(fā)檢測。雖然不是比率型探針，但其寬廣的動(dòng)力學(xué)范圍使其甚至能檢測到變化很小的K+濃度。EPG-2 AM用近紅外波長的雙光子激發(fā)下信號很強(qiáng)且抗熒光淬滅很好。也適用于共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀和高通量篩選分析。

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)品特性

1）   分子式：C55H64Cl2N2O19

2）   分子量：1128.02 g/mol

3）   純度：＞ 80%（HPLC）

4）   激發(fā)波長：526 ± 3 nm（in methanol）

5）   發(fā)射波長：546 ± 3 nm（in methanol）

6）   解離常數(shù)（Kd）：18mM

7）   動(dòng)力學(xué)范圍（Fmax/Fmin）：12

8）   溶解性：溶于DMSO

9）   化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

常用操作流程（AM熒光探針）

以下步驟僅做參考，具體請根據(jù)實(shí)際情況或參考文獻(xiàn)資料來調(diào)整。

1.1    使用無水DMSO溶解EPG-2 AM（Mw：1128.02 g/mol）配制成1-5mM儲存液，比如往50μg EPG-2 AM凍干粉內(nèi)加入22μl DMSO，充分溶解后配制成2mM儲存液。-20oC分裝干燥凍存，避免反復(fù)凍融。

1.2    通常在含適當(dāng)濃度AM探針的無血清培養(yǎng)基中實(shí)現(xiàn)探針加載。建議正式實(shí)驗(yàn)前向加載培養(yǎng)基內(nèi)加入Pluronic F-127以促進(jìn)AM探針的分散?？捎肈MSO配置20% Pluronic F-127儲存液或其他濃度，只需在正式實(shí)驗(yàn)前將其與EPG-2 AM儲存液混合，然后加入加載培養(yǎng)基，保證其終濃度＜0.1%（w/v）。

1.3    室溫或37℃孵育細(xì)胞（可能在室溫的探針加載質(zhì)量會高些），孵育濃度通常為1-10µM，孵育時(shí)間通常為30-60min，具體的請根據(jù)實(shí)際情況或參考文獻(xiàn)資料。

1.4    【可選】對于大分子量AM探針（分子量≥1000g/mol），孵育結(jié)束，加入不含AM探針的細(xì)胞加載培養(yǎng)基額外孵育20-60min，以確保細(xì)胞將AM基團(tuán)完quan去酯化。

1.5    用不含血清和探針的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞至少一次，以降低細(xì)胞外背景熒光。

1.6    最后用合適的儀器來檢測熒光信號。檢測用激發(fā)波長517nm，發(fā)射波長540nm。

【注意】：

a)      如果細(xì)胞加載培養(yǎng)基是以碳suan氫鈉為緩沖體系，那么加載需要含5% CO2的環(huán)境內(nèi)進(jìn)行，以防止因CO2損失引起的培養(yǎng)基堿化。

b)      如果細(xì)胞加載培養(yǎng)基含血清，那需適當(dāng)提高AM探針工作濃度，以補(bǔ)償因AM探針與血清蛋白結(jié)合引起的損失。

c)      某些情況下，對分子量接近或超過1000的AM探針，需用不含AM探針的細(xì)胞加載緩沖液進(jìn)一步孵育20-60min，以保證細(xì)胞內(nèi)酯酶能充分降解AM基團(tuán)。

d)      探針的加載時(shí)間和濃度因具體的細(xì)胞類型而有差異，請根據(jù)具體的細(xì)胞類型來優(yōu)化。

e)      對每一種探針有必要通過校準(zhǔn)（calibration）來得到實(shí)際解離常數(shù)（Kd）。物理?xiàng)l件如溫度，pH，離子強(qiáng)度或溶液粘度，以及探針與細(xì)胞組成成分如蛋白質(zhì)的相互作用，都會影響Kd值。實(shí)際情況細(xì)胞內(nèi)的Kd比體外溶液通常要高。因此，細(xì)胞水平研究有必要進(jìn)行校準(zhǔn)確認(rèn)實(shí)際Kd值。

f)       對于EPG-2，雖然激發(fā)波長在517m，但其ji強(qiáng)的熒光亮度使其能夠用標(biāo)準(zhǔn)的488nm濾片來激發(fā)，與Fluo系列的可見光鈣離子指示探針檢測手段一致。值得注意的是，488nm激發(fā)下得到的熒光強(qiáng)度約為激發(fā)波長下的40%。

注意事項(xiàng)

1）   EPG-2 AM易受潮，粉末需干燥保存；粉末需用無水DMSO溶解，配制儲存液（如10mM），置于-20℃干燥避光保存，小量分裝避免反復(fù)凍融，至少3個(gè)月穩(wěn)定。

2）   為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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引用文獻(xiàn)：

 [1]Zhang P, Qiu Y, Wang Y, Xiao L, Yu S, Shi M, Ni Y, Miron RJ, Pu Y, Zhang Y. Nanoparticles Promote Bacterial Antibiotic Tolerance via Inducing Hyperosmotic Stress Response. Small. 2022 May;18(19):e2105525. doi: 10.1002/smll.202105525. Epub 2022 Apr 10. PMID: 35398987.

E. coli and S. aureus were stained with 2 µm EPG-2 (Shanghai Maokang Biotechnology Co., MX4513)

[2] Zhou Y, Chen Y, Zhong X, Xia H, Zhao M, Zhao M, Xu L, Guo X and You C-G (2022) Lipoxin A4 attenuates MSU-crystal-induced NLRP3 inflammasome activation through suppressing Nrf2 thereby increasing TXNRD2. Front. Immunol. 13:1060441. doi: 10.3389/fimmu.2022.1060441

Intracellular potassium ions were detected by EPG-2 AM (MX4513; Maokang Biotechnology, Shanghai, China), a fluorescence indicator for potassium ions.

[3] Chai Q, Yu S, Zhong Y, Lu Z, Qiu C, Yu Y, Zhang X, Zhang Y, Lei Z, Qiang L, Li BX, Pang Y, Qiu XB, Wang J, Liu CH. A bacterial phospholipid phosphatase inhibits host pyroptosis by hijacking ubiquitin. Science. 2022 Oct 14;378(6616):eabq0132. doi: 10.1126/science.abq0132. Epub 2022 Oct 14. PMID: 36227980.

At 48 hours after infection, medium was replaced with FBS-free DMEM containing 10 μM of Enhanced Potassium Green-2 (EPG-2) AM (Shanghai Maokang Biotechnology), 

EPG-2 AM 綠色鉀離子熒光探針EPG-2 AM 綠色鉀離子熒光探針